(1)氯仿提取法:測定方法如下:
(2)稀釋加熱法:即水稀釋加熱法作為簡便的前處理方法被普遍采用,由于稀釋倍數,加熱溫度和時間不同,結果也不全相同,其中主要方法見表6。
在這些方法中由于不確定因素太多,因此值得探索的地方很多。為了克服稀釋加熱法的缺陷,避免濁度生成,人們開發(fā)出了使用表面活性劑(0.04% TritonX -100)稀釋,80℃5分鐘加熱處理方法。這個前處理方法,能得到很好的血漿內毒素回收率。減少非特異性濁度所引起的假陽性反應。尤其是日本和光純藥的Toxinonuter ET201采用比濁時間分析法檢測,能得到很好的實驗結果。
(3)高氯酸法(PCA)與新高氯酸法(New PCA):所謂高氯酸法(PCA),即血漿加高氯酸后,產生的變性沉淀物用離心法除去,用上清液進行比色測定。后來人們又發(fā)現這些沉淀物中含有內毒素活性物質,因而對變性的血漿蛋白不進行沉淀,而進行現溶解處理,這就是新高氯酸法(New PCA),一般新高氯酸法的測定結果要比高氯酸法高8~10倍。
一般高氯酸法只測定血中游離的內毒素,而新高氯酸法可以將游離內毒素和蛋白結合內毒素一起測定出來。也就是說,新高氯酸的測定值減去高氯酸法的測定值,就等于結合型內毒素的量;我們可以同時使用兩種方法檢測以查明內毒素與蛋白的結合情況,并且可以對病人的病情發(fā)展進行分析。具體測定方法如下所示:
另外,在我們對血漿中的內毒素和鱟試驗法檢測時,前處理加熱對血漿中和水中內毒素影響要有一個認識。細菌內毒素在人體內的分布往往以兩種方式存在,一種為游離型,另外一種為蛋白結合型。我們知道,細菌內毒素在水中存在時對加熱是十分敏感的,而在血中的情況又是怎樣的?人們通過實驗發(fā)現:血漿中的內毒素在經過100℃加熱1分鐘或10分鐘,其標準曲線沒有出現明顯的差別。而水中的內毒素經1分鐘加熱后,其標準曲線趨向平坦,10分鐘加熱后,接近水平。這可能是脂多糖分子在水中加熱后出現集結的原故。而在血漿的內毒素則不同,團塊的形成會受到血小板的抑制,內毒素可與多種血液成分結合,如血小板﹑抗體、粘性蛋白等,這些物質可能保護血漿內毒素與LAL發(fā)生反應。因此這就是加熱血漿也不會破壞其內毒素的原因。