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除去血中干擾物質(zhì)的前處理方法

發(fā)布時(shí)間: 2022-12-05  點(diǎn)擊次數(shù): 713次

一般來(lái)說(shuō)由于血液的組成比較復(fù)雜,其中的許多物質(zhì)尤其是高等動(dòng)物的血漿或血清對(duì)TALLAL試劑與內(nèi)毒素反應(yīng)很強(qiáng)的干擾作用。因此當(dāng)我們對(duì)這類(lèi)樣品的內(nèi)毒素進(jìn)行測(cè)定時(shí),必須將其中的干擾物質(zhì)除去后,方可進(jìn)行檢測(cè)。

 

目前作為血漿中的干擾物質(zhì)主要有各種蛋白酶抑制劑、內(nèi)毒素結(jié)合蛋白以及纖溶酶原抑制劑等物質(zhì),對(duì)于比色法由于Xa因子能分解 Boc-LEU-Gly-Arg-PNA 肽鏈。因此在測(cè)定前排除這些干擾物是十分必要的。

除去血中干擾物質(zhì)的前處理方法主要有以下幾種,現(xiàn)分別介紹如下

 

1稀釋加熱法血漿用溶解水進(jìn)行3~10倍稀釋,然后在37 ~ 100℃水中進(jìn)行加熱處理。保溫時(shí)間一般在5~10分鐘;

2氯仿提取法血漿加等量的氯仿振動(dòng)3小時(shí),然后取上層進(jìn)行檢測(cè)

3)乙-醚處理法血漿加入乙-醚處理并在40℃保溫將乙-醚去除;

4三氟代乙酸法血漿中加入乙酸調(diào)節(jié)pH4.0后用K2HPO4調(diào)節(jié)pH7~7.5;

5表面活性劑處理法同稀釋加熱法一樣,只是將稀釋用水改為表面活性劑

6凝膠過(guò)濾法;

7堿性處理法血漿用0.2NNaOH37℃保溫10分鐘后用HCl中和

8高氯酸法PCA或新高氯酸法New PCA);

9Beads將吸附內(nèi)毒素的特殊樹(shù)脂放入血漿中,取出后,加入LAL試劑進(jìn)行反應(yīng)。

 

 

在這些方法中,常用的主要有氯仿提取法、稀釋加熱法以及高氯酸PCA法和新高氯酸New PCA其中前兩種方法由于內(nèi)毒素回收率﹑假陽(yáng)性等問(wèn)題的存在,因此在測(cè)定時(shí)需要探討,PCANew PCA,由于添加內(nèi)毒素的回收率好,目前在日本主要用于臨床前處理。

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