細(xì)菌內(nèi)毒素作為外源性致熱原的內(nèi)毒素能激活中性粒細(xì)胞等，是革蘭陰性菌細(xì)胞壁個(gè)層上的*結(jié)構(gòu)，會(huì)使中性粒細(xì)胞釋放一種叫內(nèi)源性熱原質(zhì)的物質(zhì)，其在體溫調(diào)節(jié)的中樞會(huì)引起發(fā)熱反應(yīng)。當(dāng)內(nèi)毒素經(jīng)消化道進(jìn)入人體不會(huì)產(chǎn)生危害，但內(nèi)毒素經(jīng)注射液等方式進(jìn)入血液時(shí)則引起癥狀不同的疾病。因此，藥品安全性檢驗(yàn)一個(gè)重要項(xiàng)目就是藥品注射劑中細(xì)菌內(nèi)毒素檢查。美國(guó)科學(xué)家Levin和Bang1968年建立鱟試驗(yàn)法來檢查細(xì)菌內(nèi)毒素，美國(guó)FDA于1973年制定的規(guī)則指出“鱟試劑是一種檢測(cè)細(xì)菌內(nèi)毒素的靈敏指示劑。"

1.鱟試劑的特性及與內(nèi)毒素產(chǎn)生反應(yīng)的作用機(jī)理

鱟試劑是細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法中最重要的試劑。它是鱟科血細(xì)胞（變形細(xì)胞）裂解液的凍干產(chǎn)物。鱟的血液中只有一種類型的血細(xì)胞參與循環(huán)就是被稱為變形細(xì)胞。目前制備細(xì)胞鱟試劑一種是東方鱟，另一種是美洲鱟。研究鱟試劑作用機(jī)理表明，細(xì)菌內(nèi)毒素激活鱟試劑中鱟血細(xì)胞溶解物，產(chǎn)生一系列的凝集酶反應(yīng)，形成凝固蛋白凝膠。判斷供試品中細(xì)菌內(nèi)毒素的限-量能否在規(guī)定范圍，可通過用鱟試劑檢測(cè)，或者是量化革蘭陰性菌所產(chǎn)生細(xì)菌內(nèi)毒素。

2.細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法

2.1內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)品

細(xì)菌內(nèi)毒素國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)菌株由大腸桿菌提煉精制而成，是用來檢查，校準(zhǔn)，仲裁鱟試劑靈敏度、細(xì)菌內(nèi)毒素濃度測(cè)定，干擾測(cè)試和測(cè)試方案中供試品陽(yáng)性對(duì)照和陽(yáng)性對(duì)照溶液的制備和光度測(cè)定方法的可靠性測(cè)試、凝膠檢查鱟試劑試驗(yàn)敏感性。國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)是細(xì)菌內(nèi)毒素校準(zhǔn)的參照標(biāo)準(zhǔn)，單位為內(nèi)毒素（EU），1EU等于1國(guó)際單位內(nèi)毒素（IU）。

2.2實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備

玻璃器皿在酪酸洗液、其他熱源性滅活劑、或清洗劑將充分浸泡，控干洗液后用蒸餾水3遍以上的沖洗，放入干燥箱，在250℃干烤30min以上，用以除掉可能性存在外源性內(nèi)毒素干擾。如果用塑料的器具，如微孔板和與微量加樣器配套的吸頭等，應(yīng)選用標(biāo)明無內(nèi)毒素并且對(duì)試驗(yàn)無干擾的器具。

無熱原酶標(biāo)板

2.3鱟試劑靈敏度復(fù)核

將細(xì)菌內(nèi)毒素采樣標(biāo)準(zhǔn)品與專門的檢查水在渦流攪拌器中混合溶解15min，稀釋后測(cè)定鱟試劑的靈敏度值（λc）。每一批新批次鱟試劑全部需嚴(yán)格采用靈敏度試驗(yàn)。

2.4實(shí)驗(yàn)方法

將8支鱟試劑分別加入細(xì)菌內(nèi)毒素檢查用0.1mL水溶解。按最大稀釋倍數(shù)稀釋的供試品溶液0.1mL加入2支，作為供試品溶液管，2支加入含內(nèi)毒素濃度為2λ對(duì)照溶液為供試品陽(yáng)性對(duì)照管，2支加入2λ內(nèi)毒素工作標(biāo)準(zhǔn)品溶液0.1mL作為陽(yáng)性對(duì)照管，2支加入細(xì)菌內(nèi)毒素檢查用水0.1mL作為陰性對(duì)照管。試管混勻封口置于37C±1℃恒溫器中保溫60分鐘±2分鐘，從恒溫器中慢慢取出，極緩的倒轉(zhuǎn)180°，若未形成凝膠，或者形成凝膠不堅(jiān)實(shí)、變形體從管壁下滑脫落為陰性；管內(nèi)出現(xiàn)凝膠并且凝膠不變形、如果不從管壁下滑脫落即為陽(yáng)性。拿取或者保溫試管時(shí)要避免振動(dòng)，以免出現(xiàn)假陰性檢測(cè)結(jié)果。

細(xì)菌內(nèi)毒素工作標(biāo)準(zhǔn)品

2.5實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)

準(zhǔn)備工作：肥皂洗手，用75%乙醇棉球消毒。應(yīng)在清潔環(huán)境中進(jìn)行操作，取樣時(shí)防止混入氣體，并防止微生物污染移液管。