凝膠法是一種基于鱟試劑中的多個酶蛋白在模擬的生理環(huán)境下進(jìn)行的反應(yīng)，所以在反應(yīng)過程中會受到很多生化因素的影響。此外，由于內(nèi)毒素本身的特性決定了容易被吸附和集聚，所以采用凝膠法進(jìn)行細(xì)菌內(nèi)毒素檢查時只有很少的非腸道用藥沒有干擾可直接檢查，大部分藥物存在干擾。因此，消除干擾因素的影響對于使用鱟試劑凝膠法檢查細(xì)菌內(nèi)毒素顯得十分必要。

一、凝膠法干擾類型

凝膠法鱟試劑與內(nèi)毒素反應(yīng)受諸多因素干擾，主要有二大類：抑制型干擾、增強(qiáng)型干擾。在進(jìn)行細(xì)菌內(nèi)毒素檢查時，當(dāng)供試品含有的內(nèi)毒素濃度≥2倍檢測試劑的靈敏度，但檢測結(jié)果仍為陰性時，即為抑制型干擾，抑制型干擾的結(jié)果表現(xiàn)為“假陰性"；當(dāng)供試品含有的內(nèi)毒素濃度低于檢測試劑靈敏度的1/2，但檢測結(jié)果仍為陽性時，即為增強(qiáng)型干擾，增強(qiáng)型干擾的結(jié)果表現(xiàn)為“假陽性"。

二、凝膠法干擾機(jī)制

（一）抑制型干擾

1、pH的影響

鱟試劑與內(nèi)毒素的反應(yīng)是一個復(fù)雜的酶促反應(yīng)，因此其反應(yīng)的介質(zhì)要求有合適的pH，最佳 pH范圍為6~8。為保證反應(yīng)介質(zhì)合適的pH，鱟試劑必須具有一定的pH緩沖能力。但有些檢品本身要求在酸性或堿性的介質(zhì)中保存，且自身也具有一定的pH緩沖能力，對這類檢品進(jìn)行細(xì)菌內(nèi)毒素檢查時，鱟試劑的pH緩沖能力就不足以使反應(yīng)介質(zhì)的pH緩沖到最佳范圍，會使反應(yīng)受到干擾，通常表現(xiàn)為抑制作用。

2、內(nèi)毒素修飾

內(nèi)毒素是一個具有親水，疏水兩個區(qū)域的兩性分子，這種結(jié)構(gòu)使內(nèi)毒素分子間或內(nèi)毒素分子與檢品中成分結(jié)合形成微室，內(nèi)毒素的分散性是由脂質(zhì)A形成高分子聚合物的功能和多糖與陽離子靜電引力決定的，當(dāng)內(nèi)毒素分子的聚集增加，內(nèi)毒素的鱟反應(yīng)性和熱原性都顯著下降，通常檢品中離子強(qiáng)度的較大提高會引起內(nèi)毒素的聚集和回收率降低。

3、容器效應(yīng)

內(nèi)毒素稀釋液貯存一段時間后會被破壞而失活，即使經(jīng)充分的旋渦混合也不能恢復(fù)，其中可能有多種干擾因素，但容器效應(yīng)是其中一個因素。

容器效應(yīng)與接觸內(nèi)毒素稀釋液的容器材質(zhì)有關(guān)，主要表現(xiàn)管壁對內(nèi)毒素的吸附，聚丙烯材質(zhì)還會對脂多糖復(fù)合物( LPS)產(chǎn)生深度抑制。血液透析器上存在鱟試驗(yàn)反應(yīng)物質(zhì)(LAL-Reactive Ma-terial ,LAL-RM )，凡經(jīng)過銅銨人造絲透析膜的制品，均存在使鱟試驗(yàn)陽性，但不是內(nèi)毒素的物質(zhì)。

另外稀釋管洗滌后殘留的洗滌劑，也會形成微室，影響內(nèi)毒素的分散。由于熱原是Gˉ菌細(xì)胞壁的內(nèi)毒素，是含有膦酸鏈的脂多糖，普遍存在于自然水和自來水中，所有器具的處理是否恰當(dāng)，直接影響試驗(yàn)結(jié)果。用清潔液浸泡處理過的器具與未用清潔液處理的器具用鱟法檢測內(nèi)毒素的結(jié)果差異明顯，用清潔液處理的器具可除去一些外源性內(nèi)毒素，未用清潔液處理的器具雖然也經(jīng)過干烤滅活，但器具上吸附著的細(xì)菌死亡后也可釋放出內(nèi)毒素，造成鱟試驗(yàn)假陽性反應(yīng)結(jié)果。

4、金屬離子的影響

鱟試劑中含有保持靈敏度而必需的單價(jià)和二價(jià)離子，其中二價(jià)離子對鱟反應(yīng)和內(nèi)毒素分散都起著重要作用，Ca²⁺ 、Mg²⁺離子濃度的不適宜會抑制或增強(qiáng)鱟反應(yīng)，但許多原因都會引起二價(jià)離子的不充足，從而抑制鱟試劑與內(nèi)毒素反應(yīng)的能力，比如某些藥物中，常加入有機(jī)絡(luò)合劑用來絡(luò)合重金屬離子起穩(wěn)定作用，肝素鈉、檸檬酸鈉等抗凝劑都會絡(luò)合鈣離子抑制鱟試驗(yàn)。

5、蛋白質(zhì)或酶的修飾

凝膠現(xiàn)象是基于一系列絲氨酸蛋白酶的酶促放大作用產(chǎn)生的，絲氨酸蛋白酶可以被氧化劑、抗氧化劑、蛋白水解劑或?qū)Ｒ皇Щ顒┧鶞缁?/span>，這些都會引起抑制，乙醇對蛋白質(zhì)有變性作用，因而要限制其在樣品中含量。

（二）增強(qiáng)型干擾

鱟試劑與內(nèi)毒素和葡聚糖可以共同反應(yīng)，且存在內(nèi)毒素與葡聚糖共同作用時，鱟試劑的凝膠反應(yīng)比對單一物質(zhì)作用更迅速、更劇烈。這些葡聚糖等物質(zhì)并不象內(nèi)毒素一樣具有致熱性，迄今為止的研究未表明其對人體有害，但一旦受到葡聚糖的輕微污染，就使得一些藥品雖然內(nèi)毒素含量并未超過規(guī)定限值，也會使內(nèi)毒素檢查呈現(xiàn)"假陽性"，易被誤判為不合格。

含糖大輸液與普通鱟試劑的凝膠試驗(yàn)呈較高的陽性反應(yīng)，而且糖濃度越高、裝量越大，陽性反應(yīng)率越高，葉良君等認(rèn)為葡萄糖原料中含有微量的(1-3)-B-D-葡聚糖，以及輸液的制備工藝，如制水時自來水和過濾時中性濾紙與微孔混合纖維素膜帶入的(1-3)-B-D-葡聚糖及其類似物的污染，通過β-葡聚糖激活普通鱟試劑中的G因子而發(fā)生旁路反應(yīng)，引起凝集反應(yīng)而出現(xiàn)假陽性結(jié)果。含有絲氫酸蛋白酶的生物制品也會產(chǎn)生類似內(nèi)毒素的鱟反應(yīng)，胰酶在一定條件下就具有反應(yīng)性，加熱處理可滅活胰酶，然后再作鱟試驗(yàn)分析能真正消除這種"假陽性"反應(yīng)。